目前蛋白質(zhì)化學(xué)合成研究中,固相合成方法是最常用也是最簡(jiǎn)便的方法，該方法在合成長(zhǎng)鏈多肽時(shí)同樣效果顯著，但是隨著肽鏈的延長(zhǎng)，反應(yīng)會(huì)逐漸變得更難進(jìn)行（比如大于150個(gè)氨基酸），隨著序列的增長(zhǎng)，縮合反應(yīng)空間位阻增大，為了反應(yīng)完全， 需要增加反應(yīng)時(shí)間；但是隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，其產(chǎn)生的副反應(yīng)就越多， 一些缺殘基的目標(biāo)肽就隨之產(chǎn)生。
這些缺殘基的肽鏈也是 長(zhǎng)肽合成過程中所產(chǎn)生的主要雜質(zhì)。 因此，長(zhǎng)肽的合成過程中，我們需要克服的主要困難是探索更優(yōu)質(zhì)的反應(yīng)條件和反應(yīng)方法， 從而使氨基酸縮合反應(yīng)進(jìn)行的更充分更徹底。同時(shí)縮短反應(yīng)時(shí)間，因?yàn)榉磻?yīng)時(shí)間越長(zhǎng)，不可 控的副反應(yīng)相對(duì)的就越多，副產(chǎn)物就越復(fù)雜。
我們經(jīng)過多年的摸索與積累，總結(jié)出以下經(jīng)驗(yàn)：
(1)采用微波合成法：對(duì)于合成過程中出現(xiàn)的一些難以縮合的氨基酸，我們采用微波法進(jìn) 行合成，該方法效果顯著，并且大大縮短了反應(yīng)時(shí)間，同時(shí)減少了兩種主要副產(chǎn)物的 產(chǎn)生。
(2)采用片段合成法：當(dāng)某些多肽用常規(guī)合成方法合成困難，并且難以純化時(shí)，我們也會(huì) 采用將多肽中某一段的某幾個(gè)氨基酸縮合之后作為一個(gè)整體縮合到肽鏈上去，這種方 法也能夠解決許多合成中存在的問題。
(3)采用酰肼合成法：酰肼法合成多肽的方法是固相合成的N 末端Cys 多肽和C 末端多肽 酰肼之間的化學(xué)選擇性反應(yīng)形成酰胺鍵而實(shí)現(xiàn)多肽連接的方法。該方法根據(jù)肽鏈中 Cys的位置，將整條肽鏈分成多條序列分別合成，最終經(jīng)過液相合縮反應(yīng)得到目標(biāo)肽， 該方法不僅大大縮短了長(zhǎng)肽合成時(shí)間，而且顯著地提高了最終產(chǎn)物純度，因此廣泛適 用于含有Cys的長(zhǎng)鏈多肽的合成。
